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苦豆肾茶方对免疫性前列腺炎模型大鼠ICAM―1,INF―γ,
发布者:findallove 类型:猫须草 发布时间:2018-10-21 17:39:25 浏览:3367次

  [通信作者] *张建军,研究员,博士生导师,Tel:(010)64286993,E-mail:zjj59@163.com
  [作者简介] 夏立营,副主任医师,Tel:(010)62835654,E-mail:xly1970@sina.com
  [摘要] 目的:观察苦豆肾茶方对免疫性前列腺炎大鼠前列腺组织ICAM-1,INF-γ,MCP-1的影响。方法: 采用纯化大鼠前列腺蛋白结合免疫佐剂法于第1,28天在大鼠背部多点注射建立实验性自身免疫性前列腺炎大鼠模型,并随机分为模型组、苦豆肾茶方高、低剂量组、前列泰组,另取10只大鼠背部皮下多点注射生理盐水,作为空白对照组。造模第2天开始喂药,10 mL?kg-1,苦豆肾茶方高、低剂量组灌胃苦豆肾茶方(生药9.0,4.5 g?kg-1),前列泰胶囊组灌胃前列泰(药粉0.95 g?kg-1),连续给药8周,ELISA法检测大鼠前列腺组织ICAM-1,INF-γ,MCP-1含量。结果:模型组大鼠前列腺组织ICAM-1含量较正常大鼠明显增多(P<0.05),苦豆肾茶方高剂量组可明显减少ICAM-1的生成(P<0.05);模型组大鼠前列腺组织INF-γ水平与其他各组比较无明显差异;与对照组比较,模型组大鼠前列腺组织MCP-1明显增多,苦豆肾茶方低剂量组前列腺组织MCP-1明显降低(P<0.05)。结论:苦豆肾茶方通过降低大鼠前列腺组织ICAM-1,MCP-1水平,起到抗炎免疫调节作用,这或许是其治疗慢性前列腺炎的作用机制之一。
  [关键词] 苦豆肾茶方;慢性前列腺炎;自身免疫; 细胞因子
  慢性非细菌性前列腺炎(chronic prostatitis,CAP)是中青年男性常见病,其发病机制至今尚未完全明确,近年来,自身免疫因素在CAP发生发展中的作用受到越来越多的关注[1]。苦豆肾茶方有减轻免疫性前列腺炎模型大鼠前列腺组织炎症反应的作用,可减少前列腺腺泡上皮细胞基底膜破坏,抑制炎细胞浸润,为进一步研究其作用机制,本研究观察苦豆肾茶方对自身免疫性前列腺炎大鼠前列腺组织中细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)、γ干扰素(interferon,INF-γ) 和单核细胞趋化因子-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)表达情况的影响,从免疫调节的角度探讨苦豆肾茶方治疗慢性前列腺炎的作用机制。
  1 材料
  1.1 动物 清洁级健康雄性Wistar大鼠,体重220~240 g,由中国医学科学院实验动物研究所提供,许可证号SCXK(京)2005-0013 。
  1.2 药物与试剂 苦豆肾茶方(方中苦豆子、肾茶、蒲公英水提,延胡索、土茯苓、王不留行、川牛膝醇提,丹参先醇提再水提,北京中医药大学临床中药学教研室提供,生药2 g?mL-1);前列泰胶囊(深圳高卓药业有限公司,批号060701);佐剂用卡介苗(中国食品药品检定研究院,批号20070716);Triton X-100(Solarbio);大鼠ICAM-1,INF-γ,MCP-1 ELISA试剂盒(美国RB公司,批号分别为0803221,0803094,0803220)。
  1.3 仪器 MK3酶标仪(芬兰雷勃公司);美国RA1000全自动生化仪;LD5-2A离心机(北京医用离心机制造厂)。
  2 方法
  2.1 制备抗原 参考文献报道[2]配制弗氏完全佐剂(FCA):将液体石蜡与羊毛脂按3∶1比例共热至70 ℃混匀,高温灭菌后,按5 g?L-1加入佐剂用卡介苗,无菌乳化后使用。取30只雄性Wistar大鼠,脱颈椎处死,局部皮肤消毒,下腹正中切口,分离前列腺背叶,剪除多余脂肪组织及包膜,用冷生理盐水洗净,按每克前列腺组织每毫升的比例加入含0.5%Triton X-100的生理盐水溶液(预先高温灭菌),在冰水浴上用玻璃匀浆器制成匀浆。将匀浆液3 000 r?min-1离心30 min,取上清液。以双缩脲法测定匀浆上清液的蛋白含量,以0.1 mol?L-1 pH 7.4的PBS液稀释前列腺蛋白质量浓度至20 g?L-1。研钵内放入完全弗氏佐剂,将前列腺蛋白液逐步加入FCA中,边加边同一方向研磨,使之完全乳化。
  2.2 造模与分组 50只雄性Wistar大鼠,常规饲养1周,随机分组,每组10只,即正常对照组、模型对照组、苦豆肾茶方高、低剂量组、前列泰组。将各组动物称重后,参考文献报道造模[4],10%水合氯醛3.5 mL?kg-1体重腹腔注射麻醉,对照组背部皮下多点注射灭菌生理盐水1 mL,其余4组动物背部皮下多点注射乳化后的抗原液l mL。第1,28天各注射1次。首次造模后第2天开始喂药,10 mL?kg-1,苦豆肾茶方高、低剂量组灌胃苦豆肾茶方,分别为生药9.0,4.5 g?kg-1(分别相当于60 kg成年人临床日用量的18,9倍),前列泰胶囊组灌胃前列泰,剂量为药粉0.95 g?kg-1(60 kg成年人临床日用量的10倍),对照组及模型组灌服等体积蒸馏水,每日1次,连续给药8周。8周后,10%水合氯醛麻醉,打开腹腔,取前列腺病理检查,若观察到前列腺局部组织结构损害,部分基膜被破坏,出现明显炎性细胞浸润的慢性炎症病理改变,可判定造模成功,造模成功率86%。取造模成功大鼠部分前列腺组织,每组共8只,ELISA法检测ICAM-1,INF-γ,MCP-1。     2.3 数据处理 计量资料以±s表示,多组间比较用单因素方差分析,非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换后,仍不能满足正态方差齐性要求时,用秩和检验。运用Stata 6.0软件计算分析数据。以 P<0.05 作为差异具有显著性的标准。
  3 结果
  模型组大鼠前列腺组织ICAM-1含量较正常大鼠明显增多(P<0.05),苦豆肾茶方高剂量组可明显减少ICAM-1的生成,与模型组比较有显著性差异(P<0.05),苦豆肾茶方低剂量组及前列泰组均有降低前列腺组织ICAM-1含量的作用,但与模型对照组比较无统计学意义。模型组大鼠前列腺组织INF-γ含量略有升高,但与对照组比较无明显差异。与对照组、苦豆肾茶方低剂量组比较,模型组大鼠前列腺组织MCP-1明显增多(P<0.05)。本研究发现苦豆肾茶方高剂量组可明显减少ICAM-1的生成,而低剂量对MCP-1生成有明显抑制作用,这可能与不同种类的中药其对免疫功能的作用机制不尽相同,且许多中药调节免疫功能呈双向调节性,存在某一最佳剂量有关,结果见表1。
  4 讨论
  苦豆肾茶方是高学敏教授集多年临床经验,并结合古今文献研究基础上研制的用于治疗慢性非细菌性前列腺炎的处方。本方将传统中药与地方药材相结合,方中苦豆子清热解毒燥湿,丹参活血消肿止痛,共为君药;肾茶清热除湿,利尿通淋;延胡索活血化瘀,理气止痛,两药可加强君药清热利湿,行气活血,消肿止痛的功效,共为臣药;蒲公英清热解毒,利尿通淋;土茯苓除湿解毒;王不留行走而不守,性善通达,散瘀消肿,利尿通淋;川牛膝活血祛瘀、利水通淋以驱邪,补益肝肾、强筋健骨以扶正,引药下行,直达病所,共为佐使药。诸药合用,清热利湿、活血解毒、通淋止痛。
  ICAM-1亦称CD54分子,是一种重要的细胞表面黏附分子。ICAM-1介导的细胞黏附是机体正常防御系统得以存在和维持功能的重要基础,但组织细胞ICAM-1的持久或增强表达又可导致组织器官的炎症免疫损伤[3]。刘婷婷等[4]发现在消痔灵造成的慢性非细菌性前列腺炎大鼠前列腺组织中,ICAM-1蛋白表达阳性细胞数明显升高。本实验发现,在免疫性前列腺炎模型大鼠前列腺组织中,ICAM-1表达明显增高,而苦豆肾茶方能显著降低前列腺组织异常升高的ICAM-1水平。
  INF-γ主要由活化T细胞和NK细胞产生,有广泛的免疫调节作用。有研究[5]发现IFN-γ在Ⅲa和Ⅲb患者中水平均明显高于健康对照组(P<0.05),但在Ⅲa和Ⅲb之间差异无显著性。也有研究[6]发现Ⅱ及Ⅲa型CP患者组EPS中IFN-γ水平明显高于对照组(P<0.05);Ⅲb型CP患者组IFN-γ与对照组差别无明显统计学意义。本实验研究发现,在免疫性前列腺炎模型大鼠前列腺组织中,IFN-γ含量略有增多趋势,但与对照组比较无统计学意义。或许是样本量不足,或许IFN-γ并非引起前列腺组织损伤的直接原因,今后应扩大样本量进一步研究。
  临床研究发现在很多免疫性疾病中MCP-1呈高表达[7]。本研究发现,免疫性前列腺炎模型大鼠前列腺组织中MCP-1水平明显增高,苦豆肾茶方和前列泰胶囊组大鼠前列腺组织MCP-1水平增高不明显。MCP-1对单核/巨噬细胞有很强的趋化活性,在介导炎症的发生和发展中起关键作用,MCP-1可提高单核细胞和内皮细胞之间的黏附,并介导单核细胞的趋化和活化,促进单核细胞穿过内皮屏障,分泌多种生物活性物质引起组织的损伤[8]。MCP-1对活化的自然杀伤细胞和记忆T淋巴细胞也有趋化和激活作用。
  综上所述,自身免疫因素参与了慢性前列腺炎的发病过程,在这个过程中,细胞因子间的动态平衡受到破坏。中药苦豆肾茶方通过降低前列腺组织异常升高的ICAM-1,MCP-1水平,抑制炎性细胞的迁移、黏附,阻止其穿越血管内皮细胞,减轻炎性细胞 对前列腺组织的浸润,最终减少炎性介质在前列腺组织的释放,减轻前列腺组织的炎症免疫损伤,这可能是其保护前列腺组织免受损伤的机制之一。
  [参考文献]
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  [2] 周晓辉,韩蕾,周智恒,等.免疫性慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型的形态学与分子生物学特性[J]. 中华男科学杂志,2005,11(4):290.
  [3] 贺新怀,席孝贤. 中医药免疫学[M]. 北京:人民军医出版社,2002:210.
  [4] 刘婷婷,金弘,高维滨. 电针对慢性非细菌性前列腺炎模型大鼠组织内粘附分子-1表达的影响[J]. 针灸临床杂志,2007,23(9):63.
  [5] 丁协刚,李世文,郑新民,等. 慢性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征患者前列腺液中IFN-γ、TNF-β1的检测[J]. 中华男科学杂志,2006,12(11):982.
  [6] 孙文东,赵升田,张怀强,等. 慢性前列腺炎患者前列腺液IFN-γ和IL-10的表达变化及意义[J]. 中国男科学杂志,2006,20(6):19.
  [7] 杨敬华,周巧玲,聂晚年,等. 狼疮肾炎患者尿MCP-1测定的临床意义[J]. 医学临床研究,2007,24(12):2069.
  [8] Adams D H, Shaws S. Leukocyte-endothelial interactions and regulation of leukocyte migration [J]. Lancet, 1994,343:831.


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